懸浮細胞免疫熒光的挑戰(zhàn)

免疫熒光(IF)技術基于抗原-抗體反應的原理，利用熒光標記抗體檢測和定位細胞或組織中的特定抗原。細胞免疫熒光(IF-IC)以細胞為樣本、細胞需牢固地生長/附著在玻片上，防止細胞在后續(xù)清洗、固定、破膜和染色時丟失。貼壁細胞能粘附生長在包被玻片上，滿足IF-IC所需結合力；但懸浮細胞不具備粘附固體表面能力，傳統(tǒng)離心甩片或涂片法制備的細胞片存在細胞分布不均、固定不牢導致后續(xù)細胞丟失的問題，影響后續(xù)染色和顯微觀察。靶點科技懸浮細胞免疫熒光專用玻片，作為這一痛點的解決方案，可以像貼壁細胞一樣處理懸浮細胞。

Shi-fix^™玻片

解決懸浮細胞免疫熒光中的難題

懸浮細胞免疫熒光專用Shi-fix^™玻片，可牢固地吸附懸浮細胞、后續(xù)可像“貼壁細胞"一樣完成IF-IC，在獲得更好結果的同時，能顯著簡化實驗流程、提高實驗效率，同時還節(jié)省經費。

Shi-fix^™plus玻片

滿足低細胞量的懸浮細胞免疫熒光需求

在實際應用中，或許會遇到細胞數量少的特殊樣本，運用Shi-fix™玻片可能達不到理想的IF-IC效果。為此Shikhar Biotech在Shi-fix™玻片基礎上升級出增強型Shi-fix™ plus玻片(具有更強的懸浮細胞吸附性)，解決低數量懸浮細胞樣本的IF-IC煩惱！同時，plus適合培養(yǎng)，為刺激實驗提供了選擇。

使用Shi-fix™玻片發(fā)表的文獻有哪些？用Shi-fix™玻片做了哪些實驗？

1.在Google Patents的Method of treatment上發(fā)表的Therapeutic and prophylactic applications of cell penetrating, anti-DNA binding proteins, in particular in the context of inflammatory disease and complications (International Patent WO2023034778A1)中，涉及細胞穿透性抗DNA結合蛋白的治療和預防應用，特別是在炎癥性疾病及其并發(fā)癥方面的應用，申請者使用Shi-fix™玻片培養(yǎng)PLB-985細胞使其貼壁，進行堿性磷酸酶和DAPI染色。

3.Portelinha等人報告了一種Polo-like激酶4與BCL-2抑制劑的治療組合，它能引發(fā)侵襲性淋巴瘤的基因組不穩(wěn)定性和細胞死亡。

其中，作者先用Shi-fix^™玻片吸附OCI-Ly19細胞，然后免疫熒光染色，驗證不同劑量CFI對細胞中心體數量的影響。細胞核(DAPI，藍色)、pericentrin(紅色)、CEP110(綠色)。

作者后續(xù)又用Shi-fix^™玻片吸附HBL-1細胞，免疫熒光染色驗證CFI或Ven及聯合對細胞中心體的影響。細胞核(DAPI，藍色)、pericentrin(紅色)。

4.Chen等人評估干擾DDR的核穿透性抗DNA自身抗體對活化的人粒細胞樣分化PLB-985細胞和從C57BL/6小鼠中分離出來的中性粒細胞解聚、釋放DNA和NETs的影響。

作者用Shi-fix^™玻片吸附PLB-985細胞驗證DX1的穿透性(AP酶顯色系統(tǒng))。

后續(xù)用DAPI(藍色)和SYTOX Green(綠色)染色吸附于Shi-fix^™玻片上的PLB-985細胞，發(fā)現DX1可抑制PMA刺激分化PLB-985細胞的染色質解聚和DNA釋放。

5.Yao等人研究證實人胃癌組織中NK細胞水平與CAFs數量成反比，CAFs通過誘導鐵死亡(鐵依賴性脂質過氧化物積累)損害NK的抗腫瘤能力。CAFs通過促進鐵超載誘導NK鐵死亡，細胞內鐵水平降低則能保護NK免受CAFs誘導鐵死亡的影響。

作者在研究中借助Shi-fix^™玻片對正常pb-NK(外周血NK)和共孵育CAFs的pb-NK染色FerroOrange，判斷細胞中“鐵池"中鐵含量。

6.研究人員將Phe和CHex修飾樹枝狀聚合物用于T細胞的pH敏感藥物遞送系統(tǒng)。樹枝狀聚合物通過內吞被內化到T細胞中，在弱酸(pH 6.5)下，細胞對其攝取能力增強。研究證實Phe和CHex修飾樹枝狀聚合物具有向T細胞及其亞群遞送的潛能，可用于腫瘤免疫療法。

研究者借助Shi-fix^™玻片完成對Jurkat細胞的免疫熒光染色，證實PAMAM-Phe-CHex和 PAMAM-CHex-Phe與CD3-PE染色T細胞相關。細胞核(DAPI，藍色)、Phe/CHex修飾樹枝狀聚合物(FITC，綠色)、溶酶體(紅色)。

7.在2021年巴塞羅那大學醫(yī)學院發(fā)布的Genetic Disruption of Transfer RNA Modifications in Human Cancer的博士論文中，為使細胞吸附更加牢固，作者借助Shi-fix^™玻片完成NCI-H82、DMS-273和HCC-33細胞的免疫熒光染色。

8.Whiteaker等人開發(fā)的51重檢測方法(DDR-2)，可量化蛋白質表達和DNA損傷反應磷酸化。該方法可對永生化淋巴母細胞系和原代人類外周血單核細胞中電離輻射誘導的DNA損傷后的信號轉導進行量化，鑒定抑制ATM的PD生物標記物，為臨床前和臨床研究提供支持。

研究者借助Shi-fix^™ coated 96-well microplate先后多次對LCL57細胞進行免疫熒光染色。

9.Kandil等人開發(fā)出新型升級版siRNA運送系統(tǒng)(Tf-PEI多聚物)，它不僅能通過受體介導的內吞作用將有效載荷特異性運送至所需的靶細胞，還能增強從內泌體囊泡中的釋放，從而在細胞質中啟動RNAi。

作者在驗證Jurkat細胞中siRNA溶酶體釋放染色時，用Shi-fix^™玻片來固定吸附Jurkat細胞。AF488-siRNA(綠色)、溶酶體(紅色)、細胞核(DAPI，藍色)。

10.論文報道一種合成的標記熒光生長抑素類似物——67/68Ga-MMC(IR800)-TOC，在體內和體外的宏觀、中觀和微觀尺度上都觀察到了受體介導的吸收。胰腺NET患者的手術生物樣本也顯示出受體特異性的藥劑結合，可清晰地劃分出與病理結果相匹配的腫瘤邊界。

在驗證細胞對Ga-MMC(IR800)-TOC的結合和內化實驗中，作者先用Shi-fix^™玻片分別吸附HCT116-SSTR2、NCI-H69和HCT116-WT細胞，與5 µM Ga-MMC(IR800)-TOC(紅色)孵育1小時后染色細胞核(綠色)，最后用共聚焦顯微鏡圖像。

使用Shi-fix™玻片部分驗證細胞結果展示圖

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